WB原理流程 最低0.27元开通文库会员，查看完整内容>；原发布者：牛君星LYWesternblot实验技术牛君星定义：印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。WesternBlot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法WesternBlot基本原理WesternBlot：采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。WesternBlot一般流程电泳。
如何提细胞的组蛋白做western blot？ 你的意思就是提取核蛋白，提取核蛋白和提取全蛋白用的裂解液是不一样的。一般情况下我们都是买试剂盒，里面包含有细胞裂解液和核裂解液，按照说明书实用就行了。1 20mmol/L的Hepe（PH 7.9）2 420mmol/L NaCl3 1.5mmol/L MgCl24 2%Igepal5 0.5mmo/L EDTA6 20%甘油7 1mmol/L DTT8 0.25mmol/L PMSF9 5ug/ml Aprotinin10 5ug/ml Pepstatin11 5ug/ml Leupeptin或者你可以按照这个配，这个是细胞核裂解液。做法就是，你按顺序提了全蛋白以后把上清弃掉，在沉淀中加入这个核裂解液，震荡然后离心，此时上清就是核蛋白了。
用western 检测磷酸化蛋白为什么要做一个去磷酸化得对照？ 那个不是去磷酸化的，是总的蛋白，包括磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白。因为普遍意义上认为，蛋白的磷酸化激活是体内磷酸化蛋白占有总的该蛋白的百分比上升，所以在做WB时，通常。
如何用WPS分析BCA测定蛋白浓度数据？ 如何用WPS分析BCA测定蛋白浓度数据，在做WeterBlot实验之前，需要对提取的蛋白样品的浓度进行检测，一般科研人员选择采用BCA试剂盒进行检测，那么按照BCA试剂盒的说明书做完。
肝组织怎么做ELISA？？和做WB提蛋白一样吗？？ 这个不一样的。ELISA相对来说要简单一些，订一个试剂盒，而组织处理的话，用PBS研磨，离心取上清就OK了。一般不用蛋白提取试剂，蛋白须保持天然结构。不可变性（除非试剂盒有特别说明）
western blot总蛋白定量必要吗求教一个基础问题：因实验室暂无分光光度计或酶标仪，WB样品不定量行吗？定量完了总蛋白量少的样品加BSA补齐的话，内参和目的蛋白的量是不变的啊，或者各孔蛋白量不等会影响电泳？请大家指教，
请教关于mtor总蛋白（WB实验）的表达量的问题 蛋白提取时使用蛋白裂解液将细胞裂解，然后离心分为上清液和下层沉淀，如果你说的是这个上清液的话，那么这个上清液是细胞中的可溶性蛋白，一般包括细胞质的蛋白和细胞核的可溶性蛋白，下层沉淀主要是细胞碎片以及不可溶的蛋白以及染色质之类
western-blot试验后得到了样本的灰度值，请问怎么算出样本蛋白的实际含量 Western-blot是一种半定量的检测手段.个人认为如果要通过灰度值来计算蛋白浓度，那就是和内参来做对比，因为内参的浓度是已知且单一条带的蛋白样品.通过待测样品盒内参样品灰度值做对比可以算出待测样品大概的浓度.个.
