求分子克隆具体实验步骤一份~~多谢各位大侠啦~ 分子克隆实验流程第一天一：目的片段的扩增（PCR）PCR反应的基本成分包括：模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板-引物结合物在。1.PCR(50ul)ddH2O 37.5ul10x buffer 5ulMgCl2（25mmol）3uldNTP（10mmol）1ulprimer 1（10mmol）1ulprimer 2（10mmol）1ulcDNA 1ulTaq 0.5ulPCR反应条件：94℃ 5min（94℃ 30s.55℃ 30s.72℃ 45s）x30 72℃ 5min.4℃保温 或者94℃ 5min（94℃ 30s.64℃ 30s.72℃ 45s）x10（94℃ 30s.66℃ 30s.72℃ 45s）x10（94℃ 30s.68℃ 30s.72℃ 45s）x10 72℃ 5min.4℃保温注意：当所要扩增的目的片段较大时需要适当的增加延伸时间（一般产物越长，需要的时间越长：1分钟/1kb）2.琼脂糖凝胶电泳检测：取5ul样品+5ul DNA Loading buffer混匀上样，。
双酶切时，是直接用pcr产物就可以，还是需要
生物上的Buffer P1成分是什么？ buffer，应该是一种缓冲物质
柱状法提取DNA原理是什么？试剂盒的胶回收柱采用特殊硅基质材料在一定的高盐缓冲系统下高效、专一地吸附DNA、RNA的原理（在高盐、低pH值情况下吸附DNA；。
如何分离质粒dna和基因组dna 分离质粒时，可以将质粒去得很干净。方法为：先用TE之类的试剂将菌液悬浮起来，再用NaOH和SDS将菌液裂解（起裂解作用的主要是NaOH，但此时，SDS可以与蛋白很好的结合）。。
生工sanprep柱式DNA胶回收试剂盒怎么用 按照说明书用就行了，用到的东西包括琼脂糖凝胶电泳仪、电子天平、水浴锅、小型高速离心机，实验室都有的。跑电泳的时候最好把电泳缓冲液换成新的。
胶回收试剂盒和PCR回收试剂盒的区别 如果确定PCR产物很纯（没有引物二聚体），完全可以用PCR产物纯化试剂盒。如果PCR产物不是很纯，或者PCR扩增条带比较小，PCR产物前面又有较多引物二聚体时，用胶回收，其余用PCR产物纯化试剂盒。pcr纯化试剂盒和胶回收试剂盒的区别：PCR纯化试剂盒：是直接水溶解的PAC产物就可以回收，回收效率高，但是只适合单一条带需要纯化测序的时候使用。PCR凝胶试剂盒：是在PCR产物是混合物，有多条杂带的情况下，先跑胶将杂带分离，然后在将所要的条带位置的胶切下回收，后者的回收效率低，但是很纯净。胶回收试剂盒操作步骤：配制琼脂糖EB凝胶，电泳以分离DNA片段。任何类型或等级的琼脂糖都可以使用。电泳足够时间后，在紫外灯下小心地把所需的DNA的片段切下来。并尽量去除多余的凝胶。称取空离心管的重量，切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量，求出凝胶块的重量，近似地确定其体积。一般情况下，凝胶的密度为1g/ml，于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算：凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml；加入等倍凝胶体积的Binding Buffer，把混合物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶完全融化，其间每隔2-3分钟混匀一次；转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个。
分离纯化DNA片段中的污染物方法和原理？生物能源方面的论坛有哪些拜托了各位 谢谢 找专业的生物方面的信息可以去生物帮，生物帮是生物行业门户网站，信息内容丰富、科学、专业，内容主要包括生命科学领域产品、技术文档、视频、生物问答、在线交流核心版块，每一个版块中有细分的栏目和内容。首先利用低熔点琼脂糖凝胶电泳DNA片段，分离目的条带DNA，然后紫外光下切割含目的DNA条带的胶块，利用胶回收试剂盒回收纯化DNA片段。试剂盒的胶回收柱采用特殊硅基质材料在一定的高盐缓冲系统下高效、专一地吸附DNA、RNA的原理(在高盐、低pH值情况下吸附DNA；低盐、高pH值情况下释放DNA。离心柱上含有Resin合成树脂，具有吸附DNA的功能)，配备设计独特的离心吸附柱式结构，使用常规台式高速离心机，在几分钟之内即可以高效回收核酸片段。仪器与试剂 实验仪器 1、琼脂糖凝胶电泳系统 2、紫外观察分析仪 3、离心机 4、单面刀片 5、恒温水浴锅 试剂 1、DNA回收试剂盒 溶胶液：6 M NaClO 4(pH 5.2)，0.03M NaAC(pH 5.2)溴酚红少许 洗液：50 mM Tris-cl，0.1 mM EDTA，pH 8.0)70%乙醇 存储液：TE buffer(10 mM Tris-cl，0.1 mM EDTA，pH 8.0).2、50×TAE(洗液：50 mM Tris-Hcl，0.1 mM EDTA，pH 8.0)70%乙醇)3、ddH2O(重蒸水，蒸馏两次的水)参考：please click to connect 。
